原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)成敗核心之一在于膠原酶的酶活純度與雜酶水平。Merck-Sigma C0773 為來(lái)源于溶組織梭菌的 Type VII 高純度膠原酶，經(jīng)色譜純化工藝制備，雜酶活性極低，兼顧高膠原消化活性與低細(xì)胞損傷特性，適用于多種軟組織、器官原代細(xì)胞解離與膠原基質(zhì)結(jié)構(gòu)研究。華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)貨號(hào) C0773-1.5KU 規(guī)格產(chǎn)品，可快速支撐細(xì)胞生物學(xué)、組織工程相關(guān)實(shí)驗(yàn)開(kāi)展。

一、產(chǎn)品基礎(chǔ)理化與酶學(xué)特性

貨號(hào)：C0773-1.5KU 

產(chǎn)品名稱：Collagenase from Clostridium histolyticum，Type VII 膠原酶 

來(lái)源：溶組織梭菌（Clostridium histolyticum） 

劑型：凍干粉末 

酶活指標(biāo)：≥4 FALGPA units/mg 固體，≥700 CDU/mg 固體（CDU 膠原消化單位）；

蛋白含量≥85%（雙縮脲法） 

分子量區(qū)間：68–130 kDa 

最適 pH：6.3–8.8；鈣離子依賴性激活，每摩爾酶需結(jié)合 4 個(gè) Ca2?發(fā)揮催化活性；可被 EGTA、β- 巰基乙醇、谷胱甘肽等螯合劑 / 還原劑抑制。 雜酶質(zhì)控：酪蛋白酶、梭菌蛋白酶（clostripain）≤1 units/mg 蛋白，低雜蛋白酶是 Type VII 最核心特征。 

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

原理簡(jiǎn)述：

溶組織梭菌膠原酶可特異性識(shí)別并切割膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)中 Pro-X-Gly-Pro 序列，區(qū)別于普通蛋白酶只能降解變性蛋白；可直接降解天然膠原纖維，打破細(xì)胞外基質(zhì)網(wǎng)架，釋放組織內(nèi)活細(xì)胞。Type VII 采用色譜純化，去除大部分中性蛋白酶、梭菌蛋白酶，在充分降解膠原的同時(shí)，大幅降低非特異性蛋白水解對(duì)細(xì)胞膜、膜蛋白的破壞，適合對(duì)細(xì)胞活性、表面抗原保留要求高的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。

二、Type VII 膠原酶選型邏輯：和粗型膠原酶的差異

很多實(shí)驗(yàn)人員容易混淆不同型號(hào) Sigma 膠原酶：

粗制膠原酶（I/II 型）：膠原酶 + 大量梭菌蛋白酶、中性蛋白酶，解離硬組織效率高，但雜酶會(huì)破壞細(xì)胞膜、細(xì)胞表面受體，容易造成細(xì)胞凋亡、抗原丟失；

Type VII（C0773）：高純化版本，膠原酶主體活性保留，梭菌蛋白酶活性被嚴(yán)格限制。

技術(shù)提示：?jiǎn)为?dú)使用 C0773 時(shí)，單純膠原降解能力強(qiáng)，但缺少中性蛋白酶輔助；對(duì)于致密組織，建議搭配低濃度彈性蛋白酶 / 胰蛋白酶聯(lián)用，提升解離效率，不建議盲目提高 C0773 濃度，避免長(zhǎng)時(shí)間酶孵育帶來(lái)細(xì)胞損傷。

三、典型應(yīng)用場(chǎng)景

原代細(xì)胞分離：人 / 小鼠腫瘤組織、腎組織、腦組織、肺上皮組織解離；大鼠肝臟灌注、非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞分離、胰腺組織消化。

組織基質(zhì)結(jié)構(gòu)研究：動(dòng)脈組織制備、晚期糖基化終產(chǎn)物 AGE 相關(guān)組織樣本前處理、軟骨、玻璃體膠原結(jié)構(gòu)解析。

組織工程：膠原支架降解模型、細(xì)胞 - 基質(zhì)互作體外模型構(gòu)建。

單細(xì)胞測(cè)序樣本制備：低雜酶優(yōu)勢(shì)，減少細(xì)胞表面蛋白降解，降低解離過(guò)程細(xì)胞應(yīng)激與凋亡，提升單細(xì)胞懸液質(zhì)量。

四、實(shí)驗(yàn)實(shí)操關(guān)鍵要點(diǎn)

緩沖體系：推薦含 CaCl?的 TESCA 緩沖液（50 mM TES，0.36 mM CaCl?，pH7.4），鈣離子是酶活必需；EDTA/EGTA 會(huì)完·全抑制酶活，配制緩沖液嚴(yán)禁帶入重金屬螯合劑。

工作濃度參考：常規(guī)組織 0.1–5 mg/mL，37℃孵育；根據(jù)組織致密程度優(yōu)化，采用間斷震蕩消化，每隔 10 min 鏡檢，組織松散后及時(shí)終止消化。

終止方式：含血清培養(yǎng)基稀釋?zhuān)蚣尤?EDTA 螯合鈣離子終止酶反應(yīng)，不建議長(zhǎng)時(shí)間高溫滅活。

分裝建議：收到凍干粉末后，無(wú)菌水溶解后分裝小管，-20℃保存，避免反復(fù)凍融造成酶活衰減。

五、質(zhì)控與供應(yīng)說(shuō)明

Merck-Sigma C0773 批次附帶 COA 證書(shū)，每批次可追溯 FALGPA、CDU 酶活與雜酶檢測(cè)數(shù)據(jù)，滿足期刊論文、課題結(jié)題的試劑溯源要求。 華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng) C0773-1.5KU 膠原酶（來(lái)源于溶組織梭菌），無(wú)需漫長(zhǎng)訂貨周期，可同步提供原廠 COA、報(bào)關(guān)資料，適配高校、科研院所、藥企研發(fā)實(shí)驗(yàn)室采購(gòu)需求。

結(jié)語(yǔ)

膠原酶選型不能只看膠原酶活力數(shù)值，雜酶水平往往是原代細(xì)胞分離、單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)失敗的隱形因素。Merck-Sigma C0773 Type VII 高純度膠原酶憑借極低梭菌蛋白酶背景，在需要保護(hù)細(xì)胞活性與膜蛋白的組織解離實(shí)驗(yàn)中具備獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，是基質(zhì)研究、原代細(xì)胞分離領(lǐng)域的經(jīng)典試劑。如需 C0773-1.5KU，可聯(lián)系華雅思創(chuàng)生物，現(xiàn)貨快速發(fā)貨。